ISO 6887-4:2003
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products
ISO 6887-4:2003 specifies rules for the preparation of samples and decimal dilutions for the microbiological examination of food products other than those covered in other parts of ISO 6887. ISO 6887-1 defines the general rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination. ISO 6887-4:2003 only describes methods of preparation that are applicable to several microorganisms simultaneously. It excludes the preparations that only apply to the detection and/or enumeration of a single microorganism where the methods of preparation are described in the relevant International Standard concerning that microorganism. ISO 6887-4:2003 is applicable to the following products: general case for acidic products; foods with a high fat content, excluding margarine and spreads; flours, whole cereal grains, cereal by-products, animal feeds and cattle cake; very hard products; gelatine; margarine and spreads; dehydrated products and freeze-dried products (except dairy products and egg products); egg and egg products; fermented products (products containing live microorganisms); pastries and cakes.
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que les produits laitiers, les produits carnés et les produits de la pêche
L'ISO 6887-4:2003 spécifie des règles pour la préparation des échantillons et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique des aliments qui ne sont pas couverts par les autres parties de l'ISO 6887. L'ISO 6887-1 définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique. L'ISO 6887-4:2003 décrit uniquement les méthodes de préparation applicables à plusieurs micro-organismes simultanément. Elle exclut les préparations ne s'appliquant qu'à la recherche et/ou au dénombrement d'un seul micro-organisme pour lequel la méthode de préparation est décrite dans la norme appropriée correspondante à ce micro-organisme. L'ISO 6887-4:2003 est applicable aux produits suivants: cas général des produits acides; aliments à haute teneur en matière grasse, à l'exclusion de la margarine et des produits à tartiner; farines, graines de céréales complètes, sous-produits de meunerie, farines animales et aliments pour le bétail; produits très durs, comme le manioc; gélatine; margarine et produits à tartiner; produits déshydratés et produits lyophilisés (hors produits laitiers et ovoproduits; oeufs et ovoproduits; produits fermentés (produits contenant des micro-organismes vivants); pâtisseries et gâteaux.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6887-4
First edition
2003-08-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples,
initial suspension and decimal dilutions
for microbiological examination —
Part 4:
Specific rules for the preparation of
products other than milk and milk
products, meat and meat products, and
fish and fishery products
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique —
Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que
les produits laitiers, les produits carnés et les produits de la pêche
Reference number
ISO 6887-4:2003(E)
©
ISO 2003
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
© ISO 2003
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2003 — All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope. 1
2 Normative references . 2
3 Terms and definitions. 2
4 Principle . 2
5 Diluents . 3
5.1 Basic materials. 3
5.2 Diluents for general use . 3
5.3 Diluents for special purposes. 3
5.4 Distribution and sterilization of the diluent. 4
6 Apparatus. 4
7 Preparation of samples . 4
7.1 Frozen products . 4
7.2 Hard and dry products. 5
7.3 Liquid and non-viscous products . 5
7.4 Heterogeneous products. 5
8 General procedures . 5
8.1 General. 5
8.2 General case for acidic products . 5
8.3 High fat foods, excluding margarines and spreads (e.g. over 20 % of total mass is fat). 5
9 Specific procedures. 6
9.1 Flours, cereal grains, cereal by-products, animal feeds and cattle cake. 6
9.2 Very hard products (e.g. cassava) . 6
9.3 Gelatine (granular or leaf form) . 6
9.4 Margarine and spreads. 7
9.5 Dehydrated products . 8
9.6 Egg products . 9
9.7 Fermented products (products containing live microorganisms). 11
9.8 Pastries and cakes. 11
10 Further decimal dilutions . 12
Bibliography . 13
© ISO 2003 — All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 6887-4 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
ISO 6887 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination:
Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions
Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products
Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products
Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat
products, fish and fishery products
iv © ISO 2003 — All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 6887-4:2003(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation
of test samples, initial suspension and decimal dilutions for
microbiological examination —
Part 4:
Specific rules for the preparation of products other than milk
and milk products, meat and meat products, and fish and
fishery products
WARNING — The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment. It
is the responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices
and to determine the applicability of regulatory limitations prior the use.
1 Scope
This part of ISO 6887 specifies rules for the preparation of samples and decimal dilutions for the
microbiological examination of food products other than those covered in other parts of ISO 6887. ISO 6887-1
defines the general rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination.
This part of ISO 6887 only describes methods of preparation that are applicable to several microorganisms
simultaneously. It excludes the preparations that only apply to the detection and/or enumeration of a single
microorganism where the methods of preparation are described in the relevant International Standard
concerning that microorganism.
This part of ISO 6887 is applicable to the following products:
general case for acidic products (see 8.2);
foods with a high fat content, excluding margarine and spreads (see 8.3);
flours, whole cereal grains, cereal by-products, animal feeds and cattle cake (see 9.1);
very hard products, e.g. cassava (see 9.2);
gelatine (see 9.3);
margarine and spreads (see 9.4);
dehydrated products and freeze-dried products (except dairy products and egg products) (see 9.5);
egg and egg products (see 9.6);
fermented products (products containing live microorganisms) (see 9.7);
pastries and cakes (9.8).
NOTE Milk and milk products are dealt with in ISO 8261.
© ISO 2003 — All rights reserved 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation
of the initial suspension and decimal dilutions
ISO 6887-2:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation
of meat and meat products
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
laboratory sample
sample prepared for sending to the laboratory and intended for inspection or testing
[ISO 7002]
3.2
test portion
measured (volume or mass) representative sample taken from the laboratory sample for use in the
preparation of the initial suspension
3.3
initial suspension (primary dilution)
suspension, solution or emulsion obtained after a weighed or measured quantity of the product under
examination (or of a test sample prepared from the product) has been mixed with, normally, a nine-fold
quantity of diluent, allowing large particles, if present, to settle
3.4
further decimal dilutions
suspensions or solutions obtained by mixing a measured volume of the initial suspension (3.3) with a nine-fold
volume of diluent and by repeating this operation with further dilutions, until a decimal dilution series, suitable
for the inoculation of culture media, is obtained
4 Principle
An initial suspension (3.3) is prepared to obtain as uniform a distribution as possible of the microorganisms
contained in the test sample.
A pre-enrichment or enrichment suspension is prepared in the same way, using the medium recommended by
the method of analysis concerned, except in special cases mentioned in each product section of this part of
ISO 6887.
If necessary, decimal dilutions (3.4) are prepared in order to reduce the number of microorganisms per unit
volume to allow, after incubation, observation of any growth (in the case of liquid media) or colonies (in the
case of agar plates or agar tubes), as stated in each specific standard.
2 © ISO 2003 — All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
In order to restrict, if required, the range of enumeration to a given interval, or if high numbers of
microorganisms are foreseen, it is possible to inoculate only the necessary decimal dilutions (at least two
successive dilutions) needed to achieve the enumeration according to the calculation described in ISO 7218.
5 Diluents
5.1 Basic materials
See ISO 6887-1.
5.2 Diluents for general use
5.2.1 Peptone salt solution
See ISO 6887-1:1999, 5.2.1.
5.2.2 Buffered peptone water
See ISO 6887-1:1999, 5.2.2.
5.3 Diluents for special purposes
5.3.1 Peptone salt solution with Bromocresol purple
5.3.1.1 Composition
Peptone salt solution (5.2.1) 1 000 ml
Bromocresol purple (0,04 % alcohol solution, e.g. ethanol solution) 0,1 ml
5.3.1.2 Preparation
Add 0,1 ml of Bromocresol purple to 1 000 ml of peptone salt solution (5.2.1).
5.3.1.3 Application
This solution may be used for the analysis of certain acidic products so that adjustment of the pH can be
carried out without the use of a sterile pH probe (see 8.2).
Bromocresol purple is yellow at acidic pH, changing to purple at pH above 6,8.
5.3.2 Phosphate buffered solution
5.3.2.1 Composition
9,0 g
Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate (Na HPO◊12H O)
2 4 2
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO) 1,5 g
2 4
Water 1 000 ml
5.3.2.2 Preparation
Dissolve the components in the water, by heating if necessary.
© ISO 2003 — All rights reserved 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 6887-4:2003(E)
If necessary, adjust the pH so that, after sterilization, it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
Place 180 ml into each flask.
Sterilize for 15 min in the autoclave set at 121 °C.
5.3.2.3 Application
Phosphate buffered solution is used as a diluent for gelatine (see 9.3) and other samples.
5.4 Distribution and sterilization of the diluent
See ISO 6887-1:1999, 5.4.
6 Apparatus
Usual microbiological laboratory equipment for general use (see ISO 7218 and ISO 6887-1) and, in particular,
the following.
6.1 Homogenizer
6.1.1 Rotary homogenizer (blender)
See ISO 7218. If a large test sample is used, the equipment should include a sterile 1 litre bowl.
6.1.2 Peristaltic homogenizer
See ISO 7218.
6.2 Domestic-type grater, sterile.
6.3 Hammer
6.4 Water baths, capable of being maintained at 45 ± 1 °C, or 40 ± 1 °C, or between 37 °C and 42 °C.
6.5 Sterile scissors, knives, scalpels and forceps
6.6 Sterile spatulas, spoons or scoops
6.7 Sterile corers (metallic probes), for taking samples at depth.
6.8 Stirring apparatus, with to-and-fro motion.
6.9 Wide-necked flasks, sterile, of capacity 500 ml.
7 Preparation of samples
7.1 Frozen products
Products stored frozen should be brought to a consistency that allows sampling; i.e. storing at 18 °C to 27 °C
(laboratory temperature) for a maximum of 3 h, or 2 °C ± 2 °C for a maximum of 24 h. Samples should be
tested as quickly as possible after that. See ISO 6887-1:1999, 9.3.
If the product is still frozen when portioning, some diluent at laboratory temperature may be used to facilitate
defrosting.
Powders should be well mixed in their containers before sampling.
4 © ISO 2003 — All rights reserved
------------------
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6887-4
Première édition
2003-08-01
Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l'examen
microbiologique —
Partie 4:
Règles spécifiques pour la préparation de
produits autres que les produits laitiers,
les produits carnés et les produits de la
pêche
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test
samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination —
Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and
milk products, meat and meat products, and fish and fishery products
Numéro de référence
ISO 6887-4:2003(F)
©
ISO 2003
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2003
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2003 — Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 2
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Diluants . 3
5.1 Composants de base . 3
5.2 Diluants d'emploi général . 3
5.3 Diluants pour des besoins particuliers. 3
5.4 Distribution et stérilisation du diluant . 4
6 Appareillage. 4
7 Préparation des échantillons. 5
7.1 Produits congelés . 5
7.2 Produits durs et secs. 5
7.3 Produits liquides et non visqueux . 5
7.4 Produits hétérogènes . 5
8 Modes opératoires généraux . 5
8.1 Généralités. 5
8.2 Cas général des produits acides. 6
8.3 Aliments à haute teneur en matière grasse, à l'exclusion de la margarine et des produits à
tartiner (par exemple plus de 20 % de matière grasse sur la masse totale). 6
9 Modes opératoires spécifiques . 6
9.1 Farines, graines de céréales, sous-produits de meunerie, farines animales et aliments
pour le bétail. 6
9.2 Produits très durs (par exemple le manioc). 7
9.3 Gélatine (en granulés ou en feuille) . 7
9.4 Margarine et produits à tartiner. 7
9.5 Produits déshydratés . 9
9.6 Ovoproduits. 10
9.7 Produits fermentés (produits contenant des micro-organismes vivants). 12
9.8 Pâtisseries et gâteaux . 12
10 Dilutions décimales suivantes. 12
Bibliographie . 13
© ISO 2003 — Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6887-4 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L'ISO 6887 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen
microbiologique:
Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales
Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits à base de viande
Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation des produits de la pêche
Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation des produits autres que les produits laitiers, les produits
carnés et les produits de la pêche
iv © ISO 2003 — Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 6887-4:2003(F)
Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de
la suspension mère et des dilutions décimales en vue de
l'examen microbiologique —
Partie 4:
Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que
les produits laitiers, les produits carnés et les produits de la
pêche
ATTENTION — L'usage de la présente norme peut impliquer l'emploi de matériels, équipements ou
manipulations dangereux. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de la présente norme d'établir les
pratiques de sécurité et règles sanitaires et de déterminer l'application prioritaire de limites
réglementaires avant usage de la norme.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 6887 spécifie des règles pour la préparation des échantillons et des dilutions
décimales en vue de l'examen microbiologique des aliments qui ne sont pas couverts par les autres parties de
l'ISO 6887. L'ISO 6887-1 définit des règles générales pour la préparation de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique.
La présente partie de l'ISO 6887 décrit uniquement les méthodes de préparation applicables à plusieurs
micro-organismes simultanément. Elle exclut les préparations ne s'appliquant qu'à la recherche et/ou au
dénombrement d'un seul micro-organisme pour lequel la méthode de préparation est décrite dans la norme
appropriée correspondante à ce micro-organisme.
La présente partie de l'ISO 6887 est applicable aux produits suivants:
cas général des produits acides (voir 8.2);
aliments à haute teneur en matière grasse, à l'exclusion de la margarine et des produits à tartiner (voir
8.3);
farines, graines de céréales complètes, sous-produits de meunerie, farines animales et aliments pour le
bétail (voir 9.1);
produits très durs, comme le manioc (voir 9.2);
gélatine (voir 9.3);
margarine et produits à tartiner (voir 9.4);
produits déshydratés et produits lyophilisés (hors produits laitiers et ovoproduits) (voir 9.5);
œufs et ovoproduits (voir 9.6);
produits fermentés (produits contenant des micro-organismes vivants) (voir 9.7);
pâtisseries et gâteaux (9.8).
NOTE Le lait et les produits laitiers font l'objet de l'ISO 8261.
© ISO 2003 — Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1:1999, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 6887-2:2003, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation
des viandes et produits à base de viande
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
échantillon pour laboratoire
échantillon dans l'état de préparation où il est envoyé au laboratoire et destiné à être utilisé pour un contrôle
ou pour des essais
[ISO 7002]
3.2
prise d'essai
échantillon représentatif mesuré (volume ou masse) prélevé sur l'échantillon pour laboratoire pour servir à la
préparation de la suspension mère
3.3
suspension mère
première dilution
suspension, solution ou émulsion obtenues après qu'une quantité pesée ou mesurée du produit à analyser
(ou de l'échantillon pour essai préparé à partir de ce produit) a été mélangée avec une quantité de diluant
égale le plus souvent à neuf fois cette quantité de produit, en laissant se déposer les particules grossières, s'il
y en a
3.4
dilutions décimales suivantes
suspensions ou solutions obtenues en mélangeant un volume mesuré de la suspension mère (3.3) avec un
volume de diluant égal à neuf fois le volume prélevé de la suspension mère et en répétant cette opération sur
chaque dilution préparée de la sorte, jusqu'à obtention d'une gamme de dilutions décimales, appropriée pour
l'ensemencement des milieux de culture
4 Principe
Préparation de la suspension mère (3.3), de façon à obtenir une répartition aussi uniforme que possible des
micro-organismes contenus dans l'échantillon pour essai.
Préparation d'une suspension de préenrichissement ou d'enrichissement de la même façon, avec utilisation
du milieu préconisé par la méthode d'analyse concernée, sauf cas particuliers mentionnés dans chaque
chapitre relatif à un produit de la présente partie de l'ISO 6887.
2 © ISO 2003 — Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
Préparation, si nécessaire, de dilutions décimales (3.4) en vue de réduire le nombre de micro-organismes par
unité de volume pour permettre, après incubation, d'observer leur éventuel développement (cas des milieux
liquides) ou d'observer les colonies (cas des boîtes ou tubes de gélose), comme précisé dans chaque norme
spécifique.
Pour restreindre, si nécessaire, le domaine de dénombrement à un intervalle donné, ou si des nombres
élevés de micro-organismes sont attendus, il est possible d'ensemencer uniquement les dilutions décimales
nécessaires (au moins deux dilutions successives) pour pouvoir effectuer le dénombrement selon le mode de
calcul décrit dans l'ISO 7218.
5 Diluants
5.1 Composants de base
Voir l'ISO 6887-1.
5.2 Diluants d'emploi général
5.2.1 Solution de peptone-sel
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.2.1.
5.2.2 Eau peptonée tamponnée
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.2.2.
5.3 Diluants pour des besoins particuliers
5.3.1 Solution de peptone-sel avec pourpre de bromocrésol
5.3.1.1 Composition
Solution de peptone-sel (voir 5.2.1) 1 000 ml
Pourpre de bromocrésol (solution alcoolisée à 0,04 %, par exemple 0,1 ml
solution dans l'éthanol)
5.3.1.2 Préparation
Diluer 0,1 ml de pourpre de bromocrésol dans 1 000 ml de solution de peptone-sel (5.2.1).
5.3.1.3 Application
Cette solution peut être utilisée pour l'analyse de certains produits acides, ce qui permet de régler le pH sans
utiliser de sonde de pH stérile (voir 8.2).
Le pourpre de bromocrésol est jaune à un pH acide et vire au pourpre à un pH au-dessus de 6,8.
© ISO 2003 — Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
5.3.2 Solution tampon de phosphate
5.3.2.1 Composition
Hydrogénophosphate disodique dodécahydraté (Na HPO ,12HO) 9,0 g
2 4 2
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO) 1,5 g
2 4
Eau 1 000 ml
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si nécessaire.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
Répartir 180 ml dans chaque fiole.
Stériliser pendant 15 min à l'autoclave réglé à 121 °C.
5.3.2.3 Application
Le tampon de phosphate est utilisé comme diluant pour les échantillons de gélatine (voir 9.3) et autres.
5.4 Distribution et stérilisation du diluant
Voir l'ISO 6887-1:1999, 5.4.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire de microbiologie pour usage général (voir l'ISO 6887-1 et l'ISO 7218) et, en
particulier, ce qui suit.
6.1 Homogénéisateur
6.1.1 Homogénéisateur (mélangeur) rotatif
Voir l'ISO 7218. Si l'échantillon pour essai utilisé est important, il convient de prévoir un matériel équipé d'un
bol de 1 litre.
6.1.2 Homogénéisateur péristaltique
Voir l'ISO 7218.
6.2 Râpe de type ménager, stérile.
6.3 Marteau
6.4 Bains d'eau, capables d'être maintenus à 45 °C ± 1 °C ou 40 °C ± 1 °C, ou entre 37 °C et 42 °C.
6.5 Ciseaux, couteaux, scalpels et pinces stériles
6.6 Spatules, cuillères ou pelles d'échantillonnage stériles
6.7 Carottiers (sondes métalliques), stériles, permettant de prélever des échantillons en profondeur.
4 © ISO 2003 — Tous droits réservés
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 6887-4:2003(F)
6.8 Agitateur à mouvement de va-et-vient.
6.9 Flacons, à large ouverture, stériles, de 500 ml de capacité.
7 Préparation des échantillons
7.1 Produits congelés
Il convient de ramener les produits stockés congelés à une consistance permettant l'échantillonnage: c'est-à-
dire en les stockant entre 18 °C à 27 °C (température du laboratoire) pendant 3 h au maximum, ou à
2 °C ± 2 °C pendant 24 h au maximum. Il convient de soumettre les échantillons à l'essai dès que possible.
Voir l'ISO 6887-1:1999, 9.3.
Si le produit est encore congelé au moment du découpage, du diluant à température ambiante peut être
ajouté, pour faciliter la décongélation.
Il convient que les poudres soient bien mélangées dans leurs récipients avant l'échantillonnage.
7.2 Produits durs et secs
Pour les produits durs ou secs, ne pas homogénéiser dans un homogénéisateur rotatif (6.1.1) plus de 2,5 min
d'affilée.
Pour les produits secs et durs ou hétérogènes, il peut être nécessaire de hacher l'échantillon pour laboratoire.
Dans ce cas, pour éviter un échauffement excessif, l'opération de hachage ne doit pas durer plus de 1 min.
7.3 Produits liquides et non visqueux
Avant l'analyse Il convient de prélever l'échantillon pour essai après avoir agité manuellement l'échantillon
pour laboratoire (par exemple 25 fois selon un arc de 25 c
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.