ISO 18593:2004
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal methods for sampling techniques from surfaces using contact plates and swabs
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal methods for sampling techniques from surfaces using contact plates and swabs
ISO 18593:2004 specifies horizontal methods for sampling techniques using contact plates or swabs on surfaces in the food industry environment (and food processing plants), with a view of detecting or enumerating viable microorganisms.
Microbiologie des aliments — Méthodes horizontales pour les techniques de prélèvement sur des surfaces, au moyen de boîtes de contact et d'écouvillons
L'ISO 18593:2004 spécifie des méthodes horizontales pour le prélèvement d'échantillons sur les surfaces se rencontrant dans l'environnement des industries agro-alimentaires (et d'autres transformateurs des produits alimentaires), en vue de rechercher ou de dénombrer des micro-organismes viables.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 18593
First edition
2004-06-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal methods for sampling
techniques from surfaces using contact
plates and swabs
Microbiologie des aliments — Méthodes horizontales pour les
techniques de prélèvement sur des surfaces, au moyen de boîtes de
contact et d'écouvillons
Reference number
ISO 18593:2004(E)
©
ISO 2004
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ISO 18593:2004(E)
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Published in Switzerland
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ISO 18593:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 18593 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
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ISO 18593:2004(E)
Introduction
It can be important to determine the presence of, or the number of, viable microbes on the surfaces of utensils,
work surfaces and other equipment in contact with food to estimate the level of contamination during
production, or the effectiveness of cleaning and disinfecting protocols.
The horizontal methods described in this International Standard include a surface contact method using
contact plates and a swab method. The contact plate method is only applicable to flat surfaces, whereas the
2
swab method can be used for all types of surfaces. For the sampling of large surfaces (> 100 cm ), sterile
cloths or sponges can be used. This alternative method is useful for the estimation of the microbial load of
surfaces. Results are often presented as hygiene scores based on the number of colony-forming units (CFU)
per square centimetre present on a test surface.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 18593:2004(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
methods for sampling techniques from surfaces using contact
plates and swabs
1 Scope
This International Standard specifies horizontal methods for sampling techniques using contact plates or
swabs on surfaces in the food industry environment (and food processing plants), with a view of detecting or
enumerating viable microorganisms.
NOTE The term “environment” means any item in contact with the food product or likely to represent a contamination
or recontamination source, for example, material, premises, operators.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General rules for microbiological examinations
3 Principle
3.1 Because these methods are not quantitatively reliable or reproducible, results should only be used in a
“trend analysis”.
3.2 A contact plate (or dipslide) filled with a suitable agar medium is pressed against the surface to be
tested. After incubation, an estimate of the surface contamination is obtained by counting the number of
developed colonies.
3.3 Using the swab method, a specified area of the surface to be examined is marked (e.g. using a template)
and then wiped. The swab sticks are broken into a tube or bottle containing a sterile dilution fluid or
neutralizing fluid and mixed by hand.
If the surface is wiped with a sterile (damp) cloth or sponge, the sampling device is stored in a known volume
2
of dilution liquid (e.g. 100 ml for 100 cm ).
In the laboratory the initial suspension and, if necessary, further decimal dilutions are used to determine the
number of microorganisms using the procedures described in the methods for the enumeration of the (groups
of) microorganisms to be investigated.
NOTE The incubation time and temperature depend on the type of microorganisms to be detected.
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ISO 18593:2004(E)
3.4 For selective media, appropriate confirmatory tests can be performed. The number of colony-forming
units of specific microorganisms per square centimetre or per swab is calculated from the number of
(confirmed) colonies.
3.5 After sampling, the surface is cleaned and disinfected, if necessary, to avoid traces of nutrients resulting
from the sampling procedure remaining on the sampled surface.
4 Culture media and dilution fluid
NOTE For further information, see the relevant International Standards for the target microorganisms to be detected
or enumerated.
4.1 Neutralizing liquid
In general, the base for neutralizing liquid is buffered peptone water, or peptone salt, or any other appropriate
diluent (such as quarter-stength Ringer's solution, phosphate buffer at pH 7,5, peptone solution at 1 g/l).
In cases where residues of disinfectants are expected, appropriate neutralizers should be added to the dilution
fluid and to the media used on the contact plates to prevent any inhibitory effect of the disinfectants on the growth
of microorganisms.
5 Apparatus and glassware
For general requirements, see ISO 7218.
Disposable apparatus is an acceptable alternative to reusable glassware if it has similar specifications.
Usual microbiological laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Contact plate, plastic dish with diameter 65 mm, filled with a controlled volume of agar medium (chosen
according to the target microrganisms), especially made for the sampling of surfaces.
Dishes vary in diameter or area, according to the type of surface to be sampled. The agar shall form a convex
meniscus with the dish.
NOTE It is also possible to use any other device (nutritive medium in a flexible or rigid container) which enables
contact with the surface to be sampled, such as a dipslide (5.2).
2 2
5.2 Dipslide, synthetic slide (7 cm to 10 cm ), one or both sides of which are covered with a layer of a
solid growth medium (chosen according to the target microorganisms).
NOTE Various growth media are available according to the microorganism(s) sought.
5.3 Swab, breakable stick with cotton or synthetic material (such as alginate or rayon) swab contained in a
tube or envelope.
The swab shall be individually wrapped and sterilized. The material used shall be documented free of
inhibiting substances.
NOTE For some types of surface, the cotton residues can contaminate the internal parts of these surfaces after
sampling.
5.4 Cloth, damp, sterile woven material, free from antimicrobial substances, packed individually in sterile
2
plastic bags, used for the sampling of large surfaces (W 100 cm ).
5.5 Sponge, damp, sterile square of flat sponge, free from antimicrobial substances, packed individually in
2
sterile plastic bags, used for the sampling of large surfaces (W 100 cm ).
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ISO 18593:2004(E)
5.6 Containers, such as bottles, tubes or flasks, suitable for the sterilization and storage of culture media.
5.7 Cool box, insulated, capable of maintaining the samples at low temperature during transportation to the
laboratory.
5.8 Graduated pipettes, having wide openings and a nominal capacity of 1 ml, graduated in 0,1 ml divisions,
or automated pipettes delivering 100 µl and 1 000 µl.
5.9 Mixer, for mixing liquids in culture tubes.
5.10 Peristaltic homogenizer or homogenizer using horizontal shaking, with sterile plastic bags to prepare
initial suspensions by peristaltic movement (peristaltic homogenizer) or vibration movement (homogenizer using
horizontal shaking).
5.11 Petri dishes, made of plastic, of diameter 65 mm.
5.12 pH-meter, capable of being read to the nearest 0,01 pH unit at 25 °C ± 1 °C, enabling measurements to be
made which are accurate to ± 0,1 pH unit.
5.13 Template, made of a corrosion-resistant material (e.g. a frame of stainless steel enclosing an area of
2 2
20 cm to 100 cm ), which is easy to clean and can be sterilized.
6 Sampling techniques
6.1 General
It is important that the laboratory receive a sample which is representative of the surface tested and has not
been changed during transport and storage, or by residues of disinfectants.
Disinfectants are generally formulated for a disinfection contact time of 5 min to 15 min. Wait for a period in
accordance with the disinfectant specification before investigating the surface with swabs or contact plates to
assess the performanc
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 18593
Première édition
2004-06-01
Microbiologie des aliments — Méthodes
horizontales pour les techniques de
prélèvement sur des surfaces, au moyen
de boîtes de contact et d'écouvillons
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal methods
for sampling techniques from surfaces using contact plates and swabs
Numéro de référence
ISO 18593:2004(F)
©
ISO 2004
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ISO 18593:2004(F)
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Publié en Suisse
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ISO 18593:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 18593 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
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ISO 18593:2004(F)
Introduction
Pour évaluer le niveau de contamination au cours de la production, ou l'efficacité des protocoles de nettoyage
et de désinfection, il peut être important de déterminer la présence, ou le nombre, de micro-organismes
viables sur les surfaces d'ustensiles, sur les plans de travail et sur des appareils en contact avec les aliments.
Les méthodes horizontales décrites dans la présente Norme internationale comprennent une méthode de
contact avec la surface au moyen de boîtes de contact et une méthode par écouvillonnage. La méthode
utilisant les boîtes de contact est uniquement applicable aux surfaces planes, contrairement à la méthode par
écouvillonnage qui peut convenir à tous les types de surface. Pour le prélèvement sur de grandes surfaces
2
(> 100 cm ), il est possible d'utiliser des éponges ou étoffes stériles; cette méthode alternative est utile pour
l'évaluation de la charge microbienne des surfaces. Les résultats obtenus sont souvent présentés sous forme
de valeurs de notation sanitaire basées sur le nombre d'unités formant colonies (UFC) par centimètre carré
présentes sur une surface d'essai.
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NORME INTERNATIONALE ISO 18593:2004(F)
Microbiologie des aliments — Méthodes horizontales pour les
techniques de prélèvement sur des surfaces, au moyen de
boîtes de contact et d'écouvillons
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie des méthodes horizontales pour le prélèvement d'échantillons sur
les surfaces se rencontrant dans l'environnement des industries agro-alimentaires (et d'autres transformateurs
des produits alimentaires), en vue de rechercher ou de dénombrer des micro-organismes viables.
NOTE Dans le contexte de la présente Norme internationale, le terme «environnement» est compris comme tout
élément entrant en contact avec le produit alimentaire ou étant susceptible de représenter une source de contamination
ou de rétrocontamination, par exemple matériel, locaux, opérateurs.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Règles générales pour les examens microbiologiques
3 Principe
3.1 Du fait que ces méthodes ne sont pas quantitativement fiables et qu'elles ne donnent pas de résultats
reproductibles, il convient de ne les utiliser que dans le cadre d'une «analyse de tendances».
3.2 Une boîte de contact (ou lamelle d'immersion) remplie du milieu approprié de gélose est pressée contre
la surface à soumettre à l'essai. Après incubation, une estimation de la contamination de la surface peut être
obtenue par dénombrement des colonies qui se sont développées.
3.3 Avec la méthode par écouvillonnage, une zone spécifiée de la surface à étudier est délimitée (par
exemple en utilisant un gabarit), puis essuyée. Les bâtonnets d'écouvillons sont introduits dans un tube (ou
flacon) contenant un diluant stérile ou un neutralisant et agités manuellement.
Si la surface est essuyée avec une éponge ou une étoffe stérile (humide), le dispositif de prélèvement est
2
conservé dans un volume connu de diluant (par exemple 100 ml pour 100 cm ).
Dans le laboratoire, la suspension mère et, si nécessaire, les dilutions décimales suivantes, sont utilisées
pour déterminer le nombre de micro-organismes selon les modes opératoires décrits dans les méthodes de
dénombrement des (groupes de) micro-organismes à rechercher.
NOTE Le temps d'incubation et la température sont fonction du type de micro-organisme à détecter.
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ISO 18593:2004(F)
3.4 Pour les milieux sélectifs, des essais de confirmation appropriés peuvent être effectués. Le nombre
d'unités formant colonie de micro-organismes spécifiques par centimètre carré ou par écouvillon est calculé à
partir du nombre de colonies (confirmées).
3.5 Si nécessaire, la surface est nettoyée et désinfectée après le prélèvement, afin d'éliminer les traces
d'éléments nutritifs restants.
4 Milieux de culture et diluant
NOTE Se reporter aux Normes internationales correspondant aux micro-organismes recherchés.
4.1 Neutralisant
En général, la base pour le neutralisant est de l'eau peptonée tamponnée, ou de la peptone sel ou tout autre
diluant approprié (tel que la solution de Ringer à 25 %, un tampon phosphate à pH 7,5, ou une solution
peptonée à 1 g/l).
Dans les cas où l'on suppose la présence de résidus de désinfectants, il convient d'ajouter des neutralisants
appropriés au diluant et aux milieux utilisés dans les boîtes de contact pour empêcher tout effet inhibiteur des
désinfectants sur la croissance des micro-organismes.
5 Appareillage et verrerie
Pour les exigences générales, voir l'ISO 7218.
Le matériel à usage unique constitue une alternative acceptable à la verrerie réutilisable s'il possède des
spécifications similaires.
Matériel courant de laboratoire de microbiologie et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Boîtes de contact en matière plastique, de 65 mm de diamètre et remplies d'un volume contrôlé de
gélose (choisie en fonction des micro-organismes recherchés), spécialement fabriquées pour le prélèvement
sur des surfaces.
Le diamètre et la superficie des boîtes de contact varient en fonction de la surface destinée au prélèvement.
La gélose doit former un ménisque convexe par rapport à la boîte en plastique.
NOTE Il est également possible d'utiliser tout autre dispositif (milieu nutritif dans un récipient souple ou rigide)
pouvant être mis en contact avec la surface destinée au prélèvement, par exemple des lamelles d'immersion (5.2).
2
5.2 Lamelles d'immersion en matière synthétique, présentant une superficie comprise entre 7 cm et
2
10 cm et dont l'une des faces (ou les deux) est (sont) recouverte(s) d'une couche de milieu solide de
croissance (choisi en fonction des micro-organismes recherchés).
NOTE Il existe divers milieux de croissance suivant le(s) micro-organisme(s) recherché(s).
5.3 Écouvillons, bâtonnets sécables comprenant une extrémité en coton ou en matériau synthétique (tel
qu'alginate ou tissu) contenu dans un tube ou dans une enveloppe.
L'écouvillon doit être emballé individuellement et stérilisé. Le matériel doit être exempt de substances
inhibitrices.
NOTE Pour certains types de surface, des résidus de coton peuvent contaminer les parties internes de ces surfaces
à la suite d'un prélèvement.
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ISO 18593:2004(F)
5.4 Étoffe, faite en matériau tissé stérile humide, exempte de substances antimicrobiennes, emballée
individuellement dans des sachets stériles en plastique, utilisée pour le prélèvement sur de grandes surfaces
2
(W 100 cm ).
5.5 Éponge, carré d'éponge plane, stérile et humide, exempte de substances antimicrobiennes, emballée
individuellement dans des sachets stériles en plastique, utilisée pour le prélèvement sur de grandes surfaces
2
(W 100 cm ).
5.6 Récipients, tels que flacons, tubes, ballons, appropriés à la stérilisation et au stockage des milieux de
culture.
5.7 Boîte réfrigérée, isolée, pouvant maintenir les échantillons à basse température pendant leur transport
au laboratoire.
5.8 Pipettes graduées, à larges ouvertures et ayant une capacité nominale de 1 ml, graduées tous les
0,1 ml ou pipettes automatiques délivrant 100 µl et 1 000 µl.
5.9 Agitateur, pour mélanger les liquides dans les tubes à cultures.
5.10 Homogénéisateur péristaltique ou homogénéisateur à agitation horizontale, utilisant des sacs
plastiques stériles pour préparer les suspensions mères par un mouvement péristaltique (homogénéisateur
péristaltique) ou par vibration (homogénéisateur à agitation horizontale).
5.11 Boîtes de Petri, en matière plastique, de 65 mm de diamètre.
5.12 pH-mètre, ayant une précision de lecture de 0,01 unité de pH à 25 °C ± 1 °C, permettant de réaliser
des mesurages ayant une exactitude de ± 0,1 unité de pH.
5.13 Gabarit, fabriqué en un matériau résistant à la corrosion (par exemple un cadre en acier inoxydable,
2 2
pouvant contenir une superficie de 20 cm à 100 cm ), facile à nettoyer et stérilisable.
6 Techniques de prélèvement
6.1 Généralités
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif de la surface soumise à l'essai et
n'ayant pas été modifié pendant le transport et le stockage ou par des résidus de désinfectants.
Les désinfectants sont généralement formulés pour un temps de désinfection par contact de 5 min à 15 min.
Attendre le temps donné sur la notice d'utilisation du désinfectant, avant d'étudier la surface au moyen des
écouvillons ou des boîtes de contact pour évaluer l'efficacité du programme de nettoyage et de désinfection
(ou toute autre disposition conformément aux spécifications des désinfectants).
Il n'est pas possible de prescrire un neutralisant qui soit adapté à toutes les situations. En général, le
sorbitane mono-oléate (30 g/l) et la lécithine
...
Questions, Comments and Discussion
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